białka

aminokwasy stabilizujące

alanina, wanila, leucyna, fenyloalanina, tryptofan, metionina histydyna, glutamina

aminokwasy destabilizujące

glicyna, kwas glutaminowy, kwas asparaginowy, lizyna, arginina, tyrozyna, asparagina, seryna, treonina, izoleucyna

funkcje bialek

mechaniczno-strukturalna (składnik błon kom., składnik szkieletu kom.) kataliza enzymatyczna, transport kom. (przekazywanie sygnału - kinazy, hormony) koordynacja funkcji biologicznych (czynniki transkryp) transport zewnątrzkom. i magazynowanie, ochrona

białka błonowe rodzaje

białka błonowe erytrocytów, białka błonowe komórek siatkówki, białka RE komórek siatkówki

Denaturacja białka

wywołana przez zmiany środowiska zmiana konformacji białka prowadząca do jego dezaktywacji (utraty funkcji biologicznej)

Renaturacja białka

po ustąpieniu przyczyny denaturacji może nastąpić ponowne fałdowanie prowadzące do odtworzenia się struktury natywnej

Jak powstaje struktura trzeciorzędowa a jak czwartorzędowa

W procesie zwanym fałdowaniem białek. Potem następuje ewentualna asocjacja podjednostek prowadząca do powstania struktury czwartorzedowej

opisz proces fałdowania białek

Jest to proces w którym dochodzi do ustalenia się trzeciorzędowej struktury białek, jest to konformacja natywna czyli przyjmowanie i utrzymanie przez białka tej struktury umożliwia uzyskanie i zachowanie aktywności biologicznej

Opisz zmiany konformacji białek

mogą być wynikiem naturalnych procesów, z uwagi na: realizowana funkcje białka (wynikająca ze związania substratu lub kofaktora), regulowanym przechodzeniem od formy nieaktywnej do aktywnej i odwrotnie.

Czynniki denaturujace

ciepło i zmiany wartości pH, detergenty SDS i rozpuszczalniki organiczne (aceton, etanol), czynniki chaotropowe (mocznik, chlorowodorek guanidyny), czynniki redukujące (betamerkaptoetanol, 2merkaptoetanol)

Co to są chaperony (białka opiekuńcze)

białka odpowiadające za renaturacje w przypadku gdy czynnik denaturujacy białek w komórce nie jest zbyt mocny. Biorą również udział w fałdowaniu białek

kim jest i co wykazał Christian Andinsen

Pionier białkowy, udowodnił że białka są ułożone w kolejności w jakieś są kodowane. Wykazal że pracując na zdenaturowanej rybonukleazie możliwe jest ponowne ufaldowanie białka i odzyskanie jego aktywność enzymatycznej przy odpowiednich warunkach

Co to jest struktura natywna enzymu?

Struktura natywna enzymu to jego naturalna, biologicznie aktywna forma, w której białko (lub kompleks białkowy) jest poprawnie sfałdowane i funkcjonuje zgodnie ze swoją biologiczną rolą.

Na czym bylo prowadzone badanie Anfinsena?

badanie było prowadzone na rybonukleazie A której aktywność łatwo sprawdzić ponieważ jest to białko które zawiera 124 reszty aminokwasowe, 8 reszt cysteiny i 4 mostki disiarczkowe

Jak wyglądał przebieg badania pioniera Białkowego?

wyprod. rybonukleaze A po izolacji stwierdził że jest ona akt. - dodał do niej betamerkapt. (związek redukujący, spowod. rozerwanie mostków disiarczk.) i 8 molowy mocznik (związek chaetropowy spowodował utratę wiązania wodorow. w str. 2 i 3).

Za co odpowiadają modyfikacje białek?

za zmianę str. i uzyskanie dojrzałej formy białka, regulacje czasu trwania danego białka i kontrolę funkcji białek, umożliwiają oddziaływanie z innymi białkami lub kw. nukleinowymi, doprowadzenie białka do odpowiednich przedziałów kom.

Rodzaje modyfikacji białek

fosforylacja, glikozylacja, metylacja, hydroksylacja, ubikwitynacja

Rodzaje glikozylacji

N-glikozylacja (tylko u eukariota) O-glikozylacja (eukariota i prokariota)

Kiedy ma miejsce odcięcie formylometioniny?

odcięcie f-Met to proces który ma miejsce podczas inicjacji translacji białek u bakterii i w mitochondriach. I jeśli po tym odcięciu jako pierwsze wystąpi tryptofan, tyrozyna, Phe, lizyna, arginina i leucyna to okres półtrwania takiego białka to 2min

Co to są histony?

To białka bogate w lizynę czyli aminokwasy dodatnio naładowane dzięki czemu łączą się one z ujemnie naładowanym DNA

acetylacja i deacetylacja

histony a dokładnie lizyny ulegają procesowi acetylacji, zmienia się ich ładunek stają się bardziej ujemne - z heterochromatyny tworzy się euchromatyna, struktura luźniejsza co pozwala na proces translacji.

metylacja i demetylacja histonów

metylacja dotyczy głównie lizyny w histonach H3 i H4 oraz argininy, zwiększa zbicie białek. Dochodzi do przeniesienia grup metylowej od 1 - 3 przez metylotransferazy zwiększa się ładunek dodatki, zasadowych charakter białka oraz zacieśnia się struktura

Jakie są sposoby zmiany struktury białka?

Jednym z głównych sposobów zmian w strukturze białek jest proces fosforylacja. Podlegają nim głównie reszty seryny, tyrozyny, treoniny w stosunku 1000:100:1 katalizują go kinazy - odpowiada ona głównie za zmianę struktury białka a więc za:

Zmiana bialka połączona z rozerwaniem wiązania peptydowego - 2 sposoby

1. Jeszcze podczas syntezy N-koncowego końca aminokwasu 2. po syntezie białka, wewnątrz łańcucha np odcinanie sekwencji sygnałowej lub odcinanie peptydów łączących np wszystkie białka sekcyjne

Odcinanie sekwencji sygnałowej jest charakterystyczne dla:

białek sekrecyjnych które w naturalnym środowisku podlegają sekrecji, wszystkich białek występujących w chloroplastach czy mitochondriach

Co to są białka sekrecyjne?

Białka sekrecyjne to np insulina, która po translacji wchodzi do retikulum Endoplazmatycznego i jest modyfikowana. Białka sekrecyjne są syntetyzowane w komórkach a następnie transportowane poza komórkę.

Jakie są formy insuliny i która jest uznana za dojrzała insulinę

1. preproinsulina 110aa 2. preinsulina 86aa 3. insulina 51aa - dojrzała forma insuliny

Opisz powstanie preproinsuliny 110aa

Jest to forma obecna po translacji o długości 110 reszt aminokwasowych, zawiera segmenty A B i C oraz sekwencje sygnałowa która kieruje preproinsuline do siateczki śródplazmatycznej, po przejściu przez błonę sekwencja sygnałowa jest usuwana

Opisz powstanie proinsuliny 86aa

Powstaje po odcięciu sekwencji sygnałowej w retikulum Endoplazmatycznym w skutek czego zachodzi proces fałdowania białka przy udziale białek pomocniczych i disulfidoizomeraz - odpowiadają za powstanie właściwych wiązań disiarczkowych między cysteinami.

Opisz powstanie insuliny 51aa

Forma po odcięciu segmentu C, w siateczce śródplazmatycznej zawiera segmenty A i B i jest to dojrzała forma insuliny powstała w skutek usunięcia segmentu C na skutek utworzenia prawidłowych mostków disiarczkowych

Opisz modyfikacje czynnika transkrypcyjnego NF-kB

Białko pełniące kluczową rolę w regulacji odp. immunolog. Na akt. transkr. ma m. in wpływ czynnika transkryp. NF-kB - występuje w postaci Dimera - włączany i wyłączany zależnie od potrzeb. Jeśli Czynnik transkr. jest nie potrzeb. zatrzym. jest w cytopl

O-glikozylacja co to jest i na czym polega u prokariota

jest to dołączenie cukru do at. tlenu, wpływa na stabilność białka, jego akt. biolog. jak i lokalizację, zachodzi po syntezie białka. Występuje zarówno u prokariota jak i eukariota. U prokar. mamy 2 możliwości. 1. dołączane są pojedyncze cukrowce w cytopl

O-glikozylacja co to jest i na czym polega u eukariota

jest to dołączanie cukru do atomu tlenu, wpływa na właściwości białka takie jak stabilność, aktywność biologiczną i lokalizacja, zachodzi po syntezie białka. U eukariota powstaje bardziej złożona struktura, dołączane są tutaj pojedynczo cukrowce

N-glikozylacja co to jest, u kogo zachodzi i na czym polega

jest to dołączane cukru do atomu azotu asparaginy, dołączany jest tutaj prekursor cukrowy. Zachodzi tylko i wyłącznie i org. eukariotycznych, ma bardziej skomplikowana strukturę. Zaczyna się RE, po ufałdowaniu o przejściu kontroli jakości białko trafia do

opisz syntezę prekursora cukrowego

pierwsze etapy tworzenia prekursora cukrowego zachodzą po zewnętrz. stronie błony RE, występ. tu dichiol przechodzący wielokrotnie przez błonę RE. Wpierw dołączone są do niego 2 reszty fosforanowe, tworzy się wysokoenergetyczne wiązanie -> dołączane są 2

Czym zajmuje się inżynieria białek?

Zajmuje się ona głównie produkcją białek w różnych układach z różnych organizmów, aby produkować białko tak aby było przydatne i funkcjonalne, konieczne jest znanie jego struktury natywnej, czy jest modyfikowane i gdzie funkcjonuje

Wyjaśnij nadekspresje bialek

jest to produkcja białek, może być trwała bądź przejściowa. Trwała charakteryzuje się tym że konstrukt z którego ma zachodzić ekspresja jest wbudowany do genomu organizmu skąd jest przekazywany poprzez podziały

Opisz układ do nadekspresji białek

układy do nadekspresji białek to: komórka bądź organizm który będzie produkował białko po wprowadzeniu konstruktu, wektor plazmidowy który zastosujemy do przygotowania konstrukcjj. Istnieją również ekstrakty bez komórkowe - mowa wtedy o układach pozakom.

Do czego wykorzystujemy nadekspresje przejściowa?

do badań oddziaływań między białkami, analizy lokalizacji białek - układ homologiczny, analizy sekwencji odpowiedzialnych za kierowanie białek do danych przedziałów komórkowych

Czym się charakteryzuje sekwencja kierująca białko do jądra, RE, mitochondriów i plastydów

Sekwencja kierująca białko do jądra charakteryzuje się aminokwasami zasadowymi, może znajdować się w różnych miejscach w sekwencji nukleotydowej. Natomiast sekwencja kierująca białko do RE, mitochondriów i plastydów ma różne aminokwasy na amonowym końcu

Z czego powinien składać się konstrukt genowy?

powinien cechować się następującymi elementami: Ori - miejsce początku replikacji pozwalające na niezależna replikację plazmidu, gen reporterowy - gen wizualizujący, gen markerowy - gen którego produkt pozwala na odzielenie komórek transformowanych

Opisz ORI

ORI - miejsce początku replikacji, pozwalające na niezależna replikację, wektory mogą posiadać Ori które dają częstsza lub rzadka replikacje pomiędzy komórkami. W przypadku zwykłego klonowania stosujemy niezależna replikację, natomiast w przypadku

opisz MSC

MSC - miejsce wielokrotnego klonowania inaczej polilinker, jest to fragm DNA gdzie znajduje się wiele sekwencji rozpoznawanych przez enzymy restrykcyjne jednakże sekwencje te nie mogą znajdować się nigdzie indziej niż na przestrzeni DNA wektora plazmidow.

Opisz Gen Markerowy

Jest to gen który pozwala na odróżnienie kom transformowanych od nie transform. może być różnicujący (gen powoduje zmianę w wyglądzie kom. transform.) bądź selekcyjny (gen chroni kom przed czynnikami które normalnie zabiłyby ja lub zablokowały jej wzrost

Opisz Gen reporterowy

są to Geny wizualizujący, których produktem są różne białka, powinny mieć następujące cechy: dostarcza prod. dającego łatwo dostrzegalne zmiany fenotypowe czyli powoduje syntezę jakiegoś prod, produkt genu wykazuje łatwość i czułość detekcji, gen nie wyst

Opisz beta-galaktozydaze

jest to enzym rozkładający wiązania glikozydowe w beta galaktozydazach, kodowany przez lac-Z, gen lac-Z jest składowa operonu laktozowego (koduje on beta galaktozydaze, hydrolizuje laktozę do glukozy i galaktozy) występuje on naturalnie w E. coli mimo to

Opisz przykład klonowania komórek

wykonamy tutaj teoretyczne klonowanie, w którym przeprowadzimy transformację z wykorzystaniem wektora mającego cechy (MSC w obrębie aminowego końca, gen beta galaktozydaze jako gen reporterowy, gen oporności na antybiotyk jako gen markerowy)

Opisz białko GFP i chromofor

GFP pochodzi od meduzy, stosow. jest jako gen reporterowy, ma masę 27kDa i jest zbud. z 238 aminokw. Jego struktura natywna tworzy cylinder zbud. z 11 kartek beta ukierunkowanych antyrownolegle, wewnątrz cylindra znajduje się alfa helisa tworzac chromofor

Opisz modyfikacje białek GFP

Meduza która prod. białko, żyje w zimnym morzu, dlatego 1 modyfikacje dotyczyły tego aby białko bylo w stanie się ufaldowac w podwyższonej temp., kolejne modyf. dotyczyły uzyskania innych kolorów emitowanego światła (możemy badań odział. białek z białkami

Zalety białka GFP

Białko to jako gen reporterowy ma wiele zalet oprócz niewielkich rozmiarów i braku toksyczności możliwe jest jego stosow w zróżnicowanych ewolucyjnie org w tym u bakterii, roślin i ssaków. jest markerem który nie potrzebuje dodatkow substratów aby wykryc

Opisz wektory z gfp

Elementy konstruktu: gen gfp, promotor i analizowane białko. Dostępne są wektory które zawierają już sekwencje GFP i odpowiedni promotor do którego wprowadzamy sekwencje kodująca nasze białko za pomocą enzymów bądź techniki Golden Gate Cloning

Opisz technikę Golden Gate Cloning

Technika ta polega na pobieraniu Insertu z plazmidu dawcy do siebie poprzez homologiczna rekombinację - nie trzeba wtedy enzymów restrykcyjnych

Opisz Promotor do wektora z GFP

jest to bardzo ważny element gdyż mamy doczynienia z ekspresja przejściowa, może on być również wykorzystywany do ekspresji trwałej. Mamy doxzyeninia z promotorem 35srRNA powtórzonym dwukrotnie. Jest to bardzo silny promotor aktywowany jest tylko u roślin

Opisz białka hybrydowe z gfp

białka te posiadają takie elementy jak promotor, gen gfp oraz nasze białko. Mamy dwie możliwości 1. promotor-nasze bialko-gfp za sekwen. kodująca analizowane białko wprowadzana jest sekwen kodująca GFP białko dołącz jest do aminowego końca należy usunąć

Opisz pierwsze badania dotyczące oddziaływań między białkami

Wykorzystano tutaj białko GFP które podzielono na dwie części, do każdej z części dołączona domeny leucynowego zippera poprzez linker, który miał spowodować że białka gfp zbliża się do siebie i sprawdzić czy jest możliwe odtworzenie funkcjonalnego bialka

Wykorzystanie GFP do oddziaływań między białkami

stosujemy gfp w celu zbadania czy w warunkach stresowych białka będą ze sobą oddziaływać, wykonujemy dwie konstrukcje 1. cDNA kodujący aminową część białka połączony z cDNA kodujący jedno białko 2. cDNA kodujący karboksylowa część białka -// drugie bialko

Opisz test alfa komplementacji

Zdolność białek do osobnego fałdowania się i tworzenia funkcjonalnego bialka jest wykorzyst. przy teście alfa komplementacji, gdzie wykorzyst. beta galaktozydaze, białko w komórkach e coli kodowane jest przez 1 gen, na potrzeby inz genet zastosowano modyf

Jak wybrać układ do nadekspresji?

wybierając układ należy się zastanowić czy biało wymaga modyfikacji, które nie są możliwe u bakterii - czyli czy wymaga N-glikozylacji. Należy również zastanowić się jaki będzie cel produkcji białka, bo jeśli ma być wykorzyst do celów medycznych lepiej

Do czego stosujemy nadekspresje trwała?

Stosujemy do: produkcji białek rekombinowanych, analizy aktywności i właściwości białek oraz do badań ich struktury, analizy mutantów, poprawy właściwości danego organizmu - u organizmów wyższych

Opisz kontrolę ekspresji polimerazy T7

ekspresja polimeraza T7 jest przeprowadzana przez polimerazę RNA E. coli, pod ścisłą kontrolą operonu laktozowego. Ekspresja polimerazy bakteriofaga T7 jest pod ścisłą kontrolą z uwagi na to, że nie chcemy zbyt szybko uzyskać produkcję białka, z uwagi na

Opisz operon laktozowy

jest to fragm nici DNA odpowiadający za wspólną transkryp genów biorących udział w metabolizmie laktozy - lacZ (koduje beta-galaktozydaze rozkładając laktozę do glukozy) lacY (koduje permeaze laktozowa umożliwiający wejście laktozy do wnętrza komórki)

Podaj dwa cele lizozymu stosowanego w nadekspresji

1. jest naturalnym inhibitorem bakteriofaga T7 2. dezintegracja ściany komórkowej podczas izolacji

regulacja ekspresji białek w systemie do nadekspresji w komórkach E. coli

Genom E. coli zawiera gen lac1 kodujący represor lac. Represor lac wiąże się z operatorem lacO blokując transkrypc. genu T7 RNA polimerazy pod kontrolą promotora i w nieobecności IPTG. W obecności IPTG represor lac jest inaktywowang, co pozwala na transkr

Cechy E. coli wykorzystywanych do nadekspresji

1 mają wklonowany gen dla polimerazy RNA bakteriofaga T7 pod ścisłą kontrolą promotora lacUV5 rozpoznawanego przez polimerazę bakter 2 mogą posiadać dodatkowy plazmid kodujący gen dla lizozymu 3 pozbawione są dwóch podstawow proteaz: cytoplazm lon i

Izolacja ciał inkluzyjnych

ciała inkluzyjne są to skupiska źle ufałdowanych białek których regiony hydrofobowe są odkryte przez co białko się klei. Do izolacji ich niezbędne są warunki denaturujace. Związki chaeotropowe takie jak 8 molowy mocznik i 6 molowy chlorowodorek guanidyny

Opisz elementu wektorów stosowanych do nadekspresji

sekwencja Ori czyli miejsce początku replikacji rozpoznawane przez aparat replikacyjny gospodarza, gen warunkujący oporność na antybiotyk - gen selekcyjny który umożliwia rozróżnienie kom stransform od nie, miejsce do klonowania polilinker, umożliwia

Jak wybrać dobrze enzym restrykcyjny?

Przy wyborze enzymu restr ważna jest bliskość sekwencji rozpoznawanej przez enzym tak aby sekwencje rozpoznawane nie nakładały się między sobą aby po przecięciu jednym enzymem nie doszlo do utraty miejsca rozpoznawanego przez drugi enzym, gdyż doszło by

Opisz proces wybierania starterów

startery muszą zawierać miejsca rozpoznawane przez wybrany przez nas wcześniej enzym restrykcyjny jako że po uzyskaniu cDNA należy wprowadzić go do wektora wybranego wcześniej, przy wyborze startera istotne jest to aby pamiętać żeby rozpoczynał się troche

Opisz co zawiera domena na karboksylowym końcu

1. bioinformatyczna analize enzymów restryk cDNA 2. analizę możliwości hydrolizy enzymami restrykcyjnymi 3. zachowanie ramki odczytu w stosunku do domeny 4. usunięcie kodonu stop z ramki odczytu 5. mutacje pewnych reszt aminokwasowych

Opisz proces budowania konstruktu do nadekspresji

jak już zamplifikujemy cDNA kodujący nasze białko, to zanim zbudujemy konstrukt i wykonamy próbę nadekspresji to cDNA należy wklonowac do zwykłego wektora gł z uwagi na możliwość sprawdzenia prawidłowości konstruktu jak i łatwość hydrolizy i klonowania

Co to jest biblioteka cDNA oraz biblioteka genomowa

Biblioteka cDNA to zbior fagów/wektorów który posiada cały zestaw transkryptomow a więc zbiór sekwencji kodujących dany org w danym momencie. Uzyskujemy je dzięki zabiegowi który polega na tym że po procesie izolacji RNA dochodzi do syntezy 1 nici potem 2

Opisz elementy konstrukcji biblioteki cDNA

1. Całkowity komórkowy RNA 2. frakcjonowanie całkowitego RNA na złożach z oligo(dt)-celuloza w celu uzyskania mRNA 3. synteza 1 nici cDNA 4. synteza 2 nici cDNA 5. ligacja z adapterem 6. hydroliza endonukleaza Xhol 7. ligacja z wektorem lambdaZAP,

Infekcja bakteriami E. coli - opisz

wysiewamy bakt na szalki z bakter wysiewamy fagi, taka wysiana biblioteka będzie zawierała 2 rejony. Mleczny (czyli bakterie które wyrosły i nie zostały zainfekowane fagami) oraz rejon jaśniejszy czyli łysinki są to miejsca gdzie rosły bakt zainfek fagami

Opisz proces hybrydyzacji bakterii e. coli

jest to selekcja biblioteki, proces ten przeprowadzamy wielokrotnie w celu identyfikacji i interesującego nas DNA 1. przełożenie na membranę - do szalki po wzroście kom i lizie przekładamy nylonowa membranę która wiąże DNA, robimy nakłucia i markerem zazn

Oczyszczanie w warunkach natywnych opisz

kiedy uzyskamy białko w frakcji rozpuszczalnej to stosujemy oczyszcz w war natyw, uzyskujemy białko które posiada natywna str i akt można je więc od razu stosować do analizy. Technika ta nie jest jednak przydatna gdy mamy białko w frakcji nierozpuszczalne

Opisz oczyszczanie w warunkach denaturujacych

uzyskujemy białka zdenaturowane pozbawione swojej natywnej str i akt. Jest to dobra technika gdyż mamy białka w frakcji nierozpusz, czyli mamy tzw ciałka i inkluzyjne które powstają poprzez nie prawidłowe ufaldowania bialka przez co refiony hydrofobowe sa

opisz cechy Agarozy Ni-NTA

są to złoża które zawierają rdzeń przyciągany przez magnez, przeważnie jest to żelazo rdzeń ten oplaszczony jest Agaroza na powierzchni której są imobilizowane jony niklu przez kwas NTA jony te mają dwa wolne wiązania przez co mogą oddział z pierścieniem

Opisz oczyszczanie na kolumnach

jest na większą skalę, mamy lepsza widoczność, widzimy wszystko co się dzieje dodatkowo możemy te złoża wykorz wielokrotnie do tego samego białka po przepłukaniu. Wykonuje się je po hodowli, po związaniu ze złożem, wprowadzamy do kolumienki całą zawartosc

Oczyszczanie białka z domena

na początku po oczyszczaniu stosuje się proteaze w celu usunięcia domeny związanej z złożem. Ważne jest aby najpierw usunąć proteaze i domenę z mieszaniny białka domeny i proteazy. Potem jeśli ponownie zastosujemy złoże z domena to domena się zwiąże a

Opisz domenę His Tag

zbudowana jest z 6 reszt histydyny, oddziałuje z jonami niklu obecnymi na złożu białka, wymywamy białko za pomocą imidazolu bądź obniżając pH. Jej temperatura indukcji to 20-37C a masa to 1kda. Ma wiele zalet ma niewielkie rozmiary przez co nie wpływa

Opisz domenę GST-TAG

domena GST-TAG to domena oddziałująca z glutationem, oddziałuje ona z glutationem w formie zredukowanej na złożu za pośrednictwem wiązania siarkowego, wymywanie 10-50mM glutationem w formie zredukowanej, jej masa to 26kda a temp indukcji 28C jest bardzo

Opisz domenę Mal-tag

to domena stanowiąca białko oddziałujące z maltoza oczyszczan zachodzi na złożu z unieruchomienia amylaza, wymywanie zachodzi tu maltoza, jej masa to 42kDa, stosowana do oczyszczania w warunkach natywnych zwiększa prawdopodobieństwo znalezienie się

Opisz domenę CBP

to domena oddziałująca z kalmodulina, pochodzi z karboksylowego końca kinazy która ściśle oddziałuje z kalmodulina w obecności jonów wapnia, stąd oddziałuje że złożem że związana kalmodulina wymywanie zachodzi przez EGTA który chelatuje jony wapnia

Opisz domenę Flag

zbudowana jest z 8 reszt aminokwasowych o charakterze hydrofilowym, sekwencje mogą być powtarzane, oczyszczanie zachodzi tu na zasadzie oddziaływania z przeciwciałem typu M, wymywanie poprzez EDTA lub obniżając temperature, stosowania do oczyszczania w

opisz Domenę ARG tag

zbudowana jest z 6 arginin, białko oczyszcza się na złożu typu sp Sephadex na zasadzie wymiany kationowej i następnie odplukujemy gradientem stężenia NaCl w warunkach zasadowych. pozwala na oczyszczanie w war natywnych jak i denat przyłączana jest tylko

Opisz Domenę TRX

jest to domena która pozwala na uzyskanie aktywnego biologicznie białka które w swej trzeciorzędowej strukturze zawiera mostki disiarczkowe ponieważ tioredoksynaza może kanalizować utworzenie mostków dwusiarczkowych w cytoplazmie ma masę 11kDa